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中 国 药 典 201兹年版 重组人胰岛素

试 品溶 液，照紫外-可见 分 光 光 度 法 （通 则 0401)测 定 ，记录最_ 人胰岛素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照含量测定
大 吸 收 波 长 （约 2 8 0 n m) 和 3 2 0 n m 波 长 处 的 吸 光 度 （A ?ax和 项下的色谱条件,以 0. 2mol/L硫酸盐缓冲液(pH 2.3)-乙腈(90 :
A 32。），按下式计算供试品溶液中总蛋白的含量，以 m g 计 。 10)为流动相A , 以乙腈-水(50 = 50)为流动相B ，按下表进行梯度洗
脱 。取对照品溶液和供试品溶液各2 5 4 ，分别注入液相色谱仪，记
总蛋白含量= V X A max—A 320 )/0 .82 录色谱图，供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致。
式 中 V 为供试品溶液的体积。
时 间 (分 钟 ） 流动相A(%) 流 动 相 B(%)
相关 蛋白质、高 分 子 蛋 白 质 、茴 体 蛋 白 残 留 量 、外源性 10
D N A 残留量、细 菌 内 毒 素 与 生 物 活 性 取 本 品 ，照重组人生 0 90 20
长 激 素 项 下 的 方 法 检 查 ，均 应 符 合 规 定 。 5 80
45 40 60
无 菌 取 本 品 ，经 薄 膜 过 滤 法 处 理 ，依 法 检 查 （通则 50 40 60
1 1 0 1 ) ，应 符 合规定。
【检査】 有 关 物 质 取 本 品 适 量 ，加 0. O l m o l /L 盐酸溶
【含量测定】 精密量取本品适量，用 0.025mol/L的磷酸 液 溶解并 稀释 制 成 每 l m l 中 含 3. 5m g 的 溶 液 ，作为供试品溶
盐缓冲液( p H 7. 0)定 量 稀 释 制 成 每 l m l 中 含 1. O m g 的 溶液 ， 液 。照含量测定项下的色谱条件，以 0 .2 m o l / L 硫酸盐缓冲液
作 为 供 试 品 溶 液 。照 重 组 人 生 长 激 素 项 下 的 方 法 测 定 。 ( p H 2.3)-乙腈（82 : 18)为 流 动 相 A , 以乙腈 -水 （50 : 50)为
流 动 相 B,按 下 表 进 行 梯 度 洗 脱 。调节 流 动 相 比 例 使 重 组 人
【类别】 同重组人生长激素。 胰 岛素 主峰的保留时间约为2 5 分 钟 ，系统适用性试验应符合
【贮藏】 密 闭 ，一2 0 °C保 存 。 含量测定项下的规定。取 供 试 品 溶 液 2 0 fJ注 人 液 相 色 谱 仪 ，
记 录色谱图，按峰面积 归一 化 法计算 ，含 A 21脱氨人胰岛素不
重组人胰岛素 得 大 于 1 .5 % ，其他杂质峰面积之和不得大于2 .0 % 。

Chongzu Ren Yidaosu

Recombinant Human Insulin 时 间 （分 钟 ） 流动相A(%) 流 动 相 B(%)
22
链A 0 78 22
36 78
II 61 33 67
67 33 67
H 一 G ly— lie ~ V a l— G lu一 G in—C ys— C y s T h r — Ser— lie — C ys

丨—— … _____________

Ser—L e u T y r — Gin一 Leu—G lu ~ A s n ~ T y r — C y s~ A sn — OH 高 分 子 蛋 白 质 取 本 品 适 量 ，加 0. Olm o l /L 盐酸溶液溶
解 并 稀 释 制 成 每 l m l 中 约 含 4 m g 的 溶 液 ，作 为 供 试 品 溶 液 。
_______________________________________ ! 照分子排阻色谱法(通 则 0514)试 验 。以亲水改性硅胶为填充
剂 （5?lOfOn);以冰醋酸 -乙腈- 0 . 1 % 精 氨 酸 溶 液 （15 : 20 :
H — P h e ~ V a l~ A s n — G in— H is— Leu— C ys— G ly— S e r~ H is— Leu 65)为流动相;流速为每分钟0.5ml;检 测波 长为 276nm。取重组
人胰岛素单体-二聚体对照品，加 0 .0 1 mol/L盐酸溶液溶解并稀
I 释制成每l m l中 约 含4 m g 的溶液，取 lOOfJ注人液相色谱仪,重
组人胰岛素单体峰与二聚体峰的分离度应符合要求。取供试品
V al— G lu— A la— L e u ~ T y r—L eu一 V al— C ys—G ly—G lu— A rg 溶 液 lOOfJ,注人液相色谱仪,记录色谱图,扣除保留时间大于重
组人胰 岛素 主峰的其他峰面积,按 峰 面 积 归 一 化 法 计 算 ，保留时
G ly — P h e — P h e —T y r ~ T h r — P r o — L y s ~ T h r — O H 5807.69 间小于重组人胰岛素主峰的所有峰面积之和不得大于1. 0% 。

链B 干 燥 失 重 取 本 品 0.2g,在 105°C干 燥至 恒重 ，减失重量
C 257 H 383 Ng5 O 77 Sg 不 得 过 1 0 . 0 % (通 则 0831)。

本品为重组技术生产的由51 个氨基酸残基组成的蛋白 炽 灼 残 渣 取 本 品 约 0.2g,依 法 检 查 （通 则 0841) ，遗留
残 渣 不 得 过 2 .0 % 。
质 。按干燥品计 算，含重组人胰岛素（包 括 A 21脱氨人胰岛素）
锌 精 密 称 取 本 品 适 量 ，加 0. O l m o l / L 盐 酸溶液溶解并
应为95. 0 % ?105. 0 % 。 定 量 稀 释 制 成 每 l m l 中 约 含 0 .l m g 的 溶 液 。另精密量取锌
单元素标准溶液（每 l m l 中 含 Z n 1 0 0 0 哗 ) 适 量 ，用 0 . 0 1 m o l / L
每 1 单位重组人胰岛素相当于0. 0 347mg。 盐 酸 溶 液 分 别 定 量 稀 释 成 每 l m l 中 含 锌 0 .2 % 、0 .4Mg 、
0 .6 f/g、0 .8 /ig、l. Ofig与 1 .2[ig的梓 标准溶 液。照原子吸收分
【制 法 要 求 】 本 品 为 重 组 D N A 技 术 产 品 ，生产过程应符 光光度法（通 则 0406第一法），在 213. 9 n m 的波长处测定吸光
度 ，按干燥品 计,含锌 （Zn)量 不 得 大 于 1.0% 。
合《人 用 重 组 D N A 技未产品总论》(三部总论）的要求.。
微 生 物 限 度 取 本 品 0.3g,照非无菌产品微生物限度检
【性 状 】 本品为白色或类白色的结晶性粉末。

本 品 在 水 、乙 醇 和 乙 醚 中 几 乎 不 溶 ，在 稀 盐 酸 和 稀 氢 氧 化

钠溶液中易溶。

【鉴 别 】 （1)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶

液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

(2)取本品适量，加 0_1%三氟醋酸溶液溶解并稀释制成每

l ml中含 1 0 m g 的溶液，取 20fJ,加 0. 2mol/L三羟甲基氨基甲综-

盐酸缓冲液(pH 7. 3)20fJ、0 . 1 % V 8 酶溶 液20(J与 水 140士 混 匀 ，

置 37°C水 浴 中 2 小时后, 加 磷 酸 30,作为供试品溶液;另取重组

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