Page 565 - 《中国药典》2015年版 第二部 - 复件(1)
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肝素钠                                                            中 国 药 典 2 0 1 5 年版

成 每 l m l 中 约 含 3 0 m g 的 溶 液 ，作 为 供 试 品 溶 液 ；另 取 牛 血 清        密 量 取 3ml，置 预 先 加 有 氯 化 钠 5 0 0m g的 顶 空 瓶 中 ，密 封 ，
白 蛋 白 对 照 品 适 量 ，精 密 称 定 ，分 别 加 水 溶 解 并 定 量 稀 释 制 成            作 为 对 照 品 溶 液 。 照 残 留 溶 剂 测 定 法 （通 则 0 8 6 1第 二 法 ）
每 l m l 中 各 含 0 、1 0 网 、2 0 埤 、3 0 吨 、4 0 邶 与 5 0 邶 的 溶 液 ，作为  试 验 ，采 用 6 % 氰 丙 基 苯 基 -94%二 甲 基 聚 硅 氧 烷 （或 极 性
对 照 品 溶 液 ，照 蛋 白 质 含 量 测 定 法 （通 则 0 7 3 1 第 二 法 ）测 定 。         相 似 ）为 固 定 液 的 毛 细 管 柱 为 色 谱 柱 ；起 始 温 度 为 40°C，维
按 干 燥 品 计 算 ，本 品 含 蛋 白 质 不 得 过 0 .5 % 。                        持 4 分 钟 ，以 每 分 钟 3°C的 速 率 升 温 至 58°C，再 以 每 分 钟
                                                               20°C的 速 率 升 温 至 160°C;进 样 口 温 度 为 160°C;检 测 器 温
       有 关 物 质 取 本 品 适 量 ，精 密 称 定 ，加 水 溶 解 并 定 量 稀 释           度 为 250°C ;顶 空 瓶 平 衡 温 度 为 90°C，平 衡 时 间 为 2 0 分
制 成 每 l m l 中 约 含 lOOmg的 溶 液 ，涡 旋 混 合 至 完 全 溶 解 ，精             钟 。取 对 照 品 溶 液 顶 空 进 样 ，记 录 色 谱 图 ，出 峰 顺 序 依 次
密 量 取 0. 5m l,加 lm o l/ L 盐 酸 溶 液 0. 25m l和 25% 亚 硝 酸 钠        为 甲 醇 、乙 醇 、丙 酮 、正 丙 醇 ，相 邻 各 色 谱 峰 间 分 离 度 均 应
溶 液 0. 05ml，振 摇 混 匀 ，反 应 4 0 分 钟 ，加 lm o l/ L 氢 氧 化 钠 溶        符 合 规 定 。再 取 供 试 品 溶 液 与 对 照 品 溶 液 分 别 顶 空 进 样 ，
液 0. 2m l 终 止 反 应 ，作 为 供 试 品 溶 液 ；另 取 肝 素 对 照 品                记 录 色 谱 图 。按 内 标 法 以 峰 面 积 计 算 ，甲 醇 、乙 醇 与 丙 酮
250mg，精 密 称 定 ，精 密 加 水 2ml，涡 旋 混 匀 至 完 全 溶 解 ，作为               的残留量均应符合规定。
对 照 品 溶 液 （1 ) ; 精 密 量 取 对 照 品 溶 液 （1)1. 2ml，加 2 % 硫 酸
皮 肤 素 对 照 品 0. 15m l与 2 % 多 硫 酸 软 骨 素 对 照 品 0. 15ml，作                 干 燥 失 重 取 本 品 ，置 五 氧 化 二 磷 干 燥 器 内 ，在 60°C减压
为 对 照 品 溶 液 （2 ) ;取 对 照 品 溶 液 （2)0. 1ml，用 水 稀 释 至 1ml，         干 燥 至 恒 重 ，减 失 重 量 不 得 过 5. 0 % ( 通 则 0831) 。
作 为 对 照 品 溶 液 （3 ) ;取 对 照 品 溶 液 （1)0. 4ml，加 水 0. 1ml，混
匀 ，加 l m o l / L 盐 酸 溶 液 0 .2 5 m l和 25% 亚 硝 酸 钠 溶 液                  炽 灼 残 渣 取 本 品 0. 50g，依 法 检 查 （通 则 0841) ，遗留残
0.05m l,振 摇 混 匀 ，反 应 4 0 分 钟 ，加 lm o l/ L 氢 氧 化 钠 溶 液          渣 应 为 28. 0 % ? 41. 0% 。
0 .2 m l终 止 反 应 ，作 为 对 照 品 溶 液 （4);精 密 量 取 对 照 品 溶 液
(2)0. 5ml，加 lm o l/ L 盐 酸 溶 液 0. 25m l和 25% 亚 硝 酸 钠 溶 液               纳 取 本 品 约 50mg，精 密 称 定 ，置 100ml量 瓶 中 ，加
0.05ml，振 摇 混 匀 ，反 应 4 0 分 钟 ，加 l m o l/ L 氢 氧 化 钠 溶 液          0. lm l/ L 盐 酸 溶 液 (每 l m l 中 含 氯 化 铯 1.27mg)溶 解 并 稀释 至
0 .2 m l终 止 反 应 ，作 为 对 照 品 溶 液 （5) 。 照 高 效 液 相 色 谱 法           刻 度 ，摇 匀 ，作 为 供 试 品 溶 液 。精 密 量 取 钠 单 元 素 标 准 溶 液 (每
( 通 则 0512)测 定 ，以 烷 醇 季 铵 为 功 能 基 的 乙 基 乙 烯 基 苯 -二 乙           l m l 中 含 Na 200Mg ) ，用 上 述 盐 酸 溶 液 分 别 定 量 稀 释 制 成 每 lml
烯 基 苯 聚 合 物 树 脂 为 填 充 剂 （AS11-HC阴 离 子 交 换 柱 ，2mmX              中 含 钠 25Mg、5tVg、75^g的 溶 液 ，作 为 系 列 浓 度 的 对 照 品 溶 液 。
250mm,与 AG11-HC保 护 柱 ，2mmX 50mm，或 其 他 适 宜 的 色                  照 原 子 吸 收 分 光 光 度 法 （通 则 0406第 一 法 ），在 330. Onm的波
谱 柱 以 0. 04% 磷 酸 二 氢 钠 溶 液 （用 磷 酸 调 节 p H 值 至 3 .0 ，           长 处 分 别 测 定 上 述 各 对 照 品 溶 液 和 供 试 品 溶 液 的 吸 光 度 。按
0.45pm 滤 膜 过 滤 ，临 用 前 脱 气 ）为 流 动 相 A ，以 高 氯 酸 钠 -磷             干 燥 品 计 算 ，本 品 中 含 钠 (Na)应 为 10. 5% ?13. 5% 。
酸 盐 溶 液 (取 髙 氯 酸 钠 140g，用 0.04% 磷 酸 二 氢 钠 溶 液 溶 解
并 稀 释 至 1000ml,用 磷 酸 调 节 p H 值 至 3. 0 ，0. 45 ^m 滤 膜 过                 重 金 属 取 炽 灼 残 渣 项 下 遗 留 的 残 渣 ，依 法 检 査 （通则
滤 ，临 用 前 脱 气 ）为 流 动 相 B ;流 速 为 每 分 钟 0. 22ml;检 测 波 长           0821第 二 法 ），含 重 金 属 不 得 过 百 万 分 之 三 十 。
为 202mn。按 下 表 进 行 线 性 梯 度 洗 脱 。精 密 量 取 对 照 品 溶 液
( 4 ) 、（5)各 2(^1，分 别 注 人 液 相 色 谱 仪 ，记 录 色 谱 图 ，对 照 品 溶                细 菌 内 毒 素 取 本 品 ，依 法 检 查 （通 则 1143)，每 1 单位肝
液 （4 ) 色 谱 图 中 应 不 出 现 肝 素 峰 ，对 照 品 溶 液 （5 ) 色 谱 图 中 硫         素 中 含 内 毒 素 的 量 应 小 于 0. 010EU。
酸皮肤素与多硫酸软骨素色谱峰的分离度不得小于3 .0 。 精
密 量 取 供 试 品 溶 液 20/J，注 入 液 相 色 谱 仪 ，记 录 色 谱 图 。供试                     【效 价 测 定 】 抗 X a 因 子 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 - 聚 乙 二 醇
品溶液色谱图中硫酸皮肤素的峰面积不得大于对照品溶液                                      6000缓 冲 液 （pH 8. 4) 取 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 6. 06g，氯化钠
( 5 )中 硫 酸 皮 肤 素 的 峰 面 积 （2 .0 % ) ; 除 硫 酸 皮 肤 素 峰 外 ，不得       10. 23g，乙 二 胺 四 醋 酸 二 钠 2.8g，聚 乙 二 醇 6000 l.O g ，加水
出现其他色谱峰。                                                       800ml使 溶 解 ，用 盐 酸 调 节 p H 值 至 8. 4 ,用 水 稀 释 至 1000ml。

时 间 （分 钟 ）  流 动 相 A (% )  流 动 相 B(% )                                 标 准 品 溶 液 与 供 试 品 溶 液 的 制 备 取 标 准 品 （S)和供试品
    0? 10            75           25                           (T)各 适 量 ，加 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 -聚 乙 二 醇 6000缓 冲 液 （pH
                                                               8. 4)溶 解 并 分 别 稀 释 制 成 4 个 不 同 浓 度 的 溶 液 。该 浓 度 应 在
  10? 35          75? 0       25 ? 100                         log剂量-反应的线性范围内，一 般 为 每 l m l中 含 0. 01?0 .1IU。
  35 ? 40             0           100
                                                                      抗 凝 血 酶 溶 液 取 抗 凝 血 酶 （A T IE ) ，加 三 羟 甲 基 氨 基 甲
      残 留 溶 剂 取 本 品 约 2. 0g，精 密 称 定 ，置 10ml量 瓶 中 ，加            烷 -聚 乙 二 醇 6000缓 冲 液 （pH 8. 4 )溶 解 并 稀 释 制 成 每 l m l 中
内 标 溶 液 （称 取 正 丙 醇 适 量 ，用 水 稀 释 制 成 每 l m l 中 约 含              含 抗 凝 血 酶 1IU 的溶液。
80Mg 的 溶 液 ) 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 ，摇 勻 ，精 密 量 取 3ml，置 预 先
加 有 氣 化 钠 500mg的 顶 空 瓶 中 ，密 封 ，作 为 供 试 品 溶 液 ；另取                      X a 因 子 溶 液 取 X a 因 子 （F X a ) ，加 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 -
甲 醇 、乙 醇 、丙 酮 适 量 ，精 密 称 定 ，用 内 标 溶 液 定 量 稀 释 制 成 每            聚 乙 二 醇 6000缓 冲 液 （pH 8 .4 )溶 解 并 稀 释 制 成 每 l m l 中约
l m l 中 含 甲 醇 400哗 、乙 醇 400叫 与 丙 酮 80Fg 的 混 合 溶 液 ，精           含 0. 4IU ( 或 7. ln k a t)的 溶 液 ，调 整 浓 度 ，使 其 在 以 三 羟 甲 基
                                                               氨 基 甲 烷 -聚 乙 二 醇 6000缓 冲 液 （pH 8. 4)代 替 肝 素 作 为 空 白
  ?518 ?                                                       溶 液 （B h B O 的 抗 X a 因 子 实 验 中 ，在 405nm波 长 处 的 吸 光 度
                                                               值 在 0. 8? 1. 0。

                                                                      发 色 底 物 溶 液 取 发 色 底 物 S~2765(或 其 他 F X a 特异性
                                                               发 色 底 物 ），加 水 制 成 0. 003mol/L的 溶 液 ，临 用 前 用水 稀释至
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