Page 1220 - 《中国药典》2015年版 第二部 - 复件(1)
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中 国 药 典 2 0 1 5 年版^ 胰激肽原酶
取 效 价 测 定 项 下 的 底 物 溶 液 2. 9m l，在 30°C ± 0 . 5°C预热 节 p H 值 至 7. 0 )为 流 动 相 A ，以 上 述 磷 酸 盐 缓 冲 液 （pH 7. 0)
5 分 钟 ，置 1cm 比 色 池 中 ，精 密 加 入 供 试 品 溶 液 0. 1ml，混 匀 ， 为 流 动 相 B ;柱 温 为 25°C ; 流 速 为 每 分 钟 0. 5m l; 检 测 波长 为
立 即 计 时 ，使 比 色 池 内 的 温 度 保 持 在 3 0°C ±0.5°C ，照紫外-可 280nm。按 下 表 进 行 梯 度 洗 脱 。理 论 板 数 按 胰 激 肽 原 酶 峰
见 分 光 光 度 法 （通 则 0401)，在 253nm 的 波 长 处 测 定 ，以纯度 计 算 不 低 于 1500，胰 激 肽 原 酶 主 峰 与 相 邻 杂 质 峰 之 间 的 分
项 下 的 磷 酸 盐 缓 冲 液 0 .1 m l代 替 供 试 品 溶 液 ，同 法 操 作 ，作为 离 度 不 得 低 于 0. 8 。取 流 动 相 A 、供 试 品 溶 液 及 对 照 品 溶 液
空 白 对 照 。准 确 读 取 4 分 钟 时 的 吸 光 度 (A 4) 和 6 分钟时的吸 各 20；xl，分 别 注 入 液 相 色 谱 仪 ，记 录 色 谱 图 。将 供 试 品 溶 液
光 度 (A 6) 。求 得 A 值 [ ( A 6—A 4) / 2 ] ，按 下 式 计 算 ，JR值 （水解 和 对 照 品 溶 液 的 色 谱 图 扣 除 流 动 相 A 色 谱 图 （作 为 空 白 基
速 率 ）应 为 0 .12?0. 17。 线 ），进 行 基 线 校 正 。在 供 试 品 溶 液 色 谱 图 中 ，量 取 空 白 基 线
拐 点 （约 1 6 分 钟 ）后 所 有 色 谱 峰 面 积 ，按 面 积 归 一 化 法 计 算 ，
R = — —— X 」 ~ 与 对 照 品 溶 液 主 峰 保 留 时 间 一 致 的 主 峰 面 积 不 得 低 于 75%
( 供 口 服 用 ）或 90% ( 供 注 射 用 ）。
0.0383 a X 6
式 中 a 为供试品溶液每lm l中的毫克数； 时间 （分 钟 ） 流动相A(%) 流动相B(%)
0 100 0
b 为供试品每lm g 的效价单位数。 10 100 0
( 2 )在 纯 度 项 下 记 录 的 色谱 图 中 ，供试品溶液主 峰 的 保留 0
时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 20 0 100
【检 查 】 酸 碱 度 取 本 品 适 量 ，加 水 溶 解 并 稀 释 制 成 每 35 100 100
l m l 中 含 300单 位 的 溶 液 ，依 法 测 定 （通 则 0631)，p H 值应为 36 100
5。5?7. 5。 56 0
0
溶 液 的 澄 清 度 取 本 品 适 量 ，加 水 溶 解 并 稀 释 制 成 每 干 燥 失 重 取 本 品 0. 5 g ,以 五 氧 化 二 磷 为 干 燥 剂 ，在
l m l 中 含 2 m g 的 溶 液 ，依 法 检 查 （通 则 0902第 一 法 ），溶液应 60°C减 压 干 燥 4 小 时 ，减 失 重 量 不 得 过 5 .0 % (通 则 0831) 。
澄 清 。（供 注 射 用 ）
炽 灼 残 渣 取 本 品 0. 5g，依 法 检 查 （通 则 0841) ，遗留残
脂 肪 取 本 品 1. 0g，置 具 塞 锥 形 瓶 中 ，加 乙 醚 20ml，密 渣不 得 过 3.0% 。
塞 ，时 时 旋 动 ，放 置 约 3 0 分 钟 后 ，将 乙 醚 液 倾 至 用乙 醚润 湿的
滤 纸 上 ，滤 过 ，再 用 乙 醚 10m l洗 涤 残 渣 ，合并滤液及洗液至已 细 菌 内 毒 素 取 本 品 ，依 法 检 查 （通 则 1143) ，每 1 单位胰
恒 重 的 蒸 发 皿 中 ，除 去 乙 醚 ，在 105°C干 燥 2 小 时 ，精 密 称 定 ， 激 肽 原 酶 中 含 内 毒 素 的 量 应 小 于 2. 5EU。（供 注 射 用）
遗 留 脂 肪 不 得 过 5mg。
【效价测定】 酶 活 力 标 准 品 溶 液 的 制 备 取 胰 激 肽 原
相 关 蛋 白 酶 供 试 品 溶 液 的 制 备 取 本 品 适 量 ，加纯度 酶 标 准 品 ，按 标 示 单 位 ，加 纯 度 项 下 的磷 酸盐 缓冲 液(p H 7.0)
项 下 的 磷 酸 盐 缓 冲 液 （pH 7. 0 ) 溶 解 并 稀 释 制 成 每 l m l 中含 适量使溶解并定量稀释制成每lm l中 含 10单位的溶液。
1 单位的溶液。
供 试 品 溶 液 的 制 备 取 本 品 适 量 ，精 密 称 定 ，加 上 述磷 酸
测 定 法 精 密 量 取 供 试 品 溶 液 l m l 置 试 管 中 ，在 35°C 士 盐 缓 冲 液 (pH 7. 0 )适 量 使 溶 解 并 定 量 稀 释 制 成 每 l m l 中约含
0. 5°C水 浴 中 保 温 5 分 钟 ，精 密 加 入 已 预 热 至 35°C±0. 5°C的酪 10单位的溶液。
蛋白溶液( 取 酪 蛋 白 0. 6g，加 0. 05m ol/L磷 酸 氢 二 钠 溶 液 80ml，
65°C加 热 溶 解 ，放 冷 ，调 节 p H 值 至 8。0 ，用 水 稀 释 至 100ml，临 底 物 溶 液 的 制 备 取 外 苯 甲 酰 -L-精 氨 酸 乙 酯 盐 酸 盐
用前配制）5ml，混 勻 ，于 35°C±0.5°C水 浴 中 准 确 反 应 2 0 分 钟 ， 17. 7mg，加 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 缓 冲 液 (称 取 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷
再 精 密 加 人 5% 三 氯 醋 酸 溶 液 5ml，混 勻 ，滤 过 ，取 续 滤 液 作 为 12. 14g，加 水 800ml溶 解 ，用 6 m o l/L 盐 酸 溶 液 调 节 p H 值至
测 定 溶 液 ；另 精 密 量 取 供 试 品 溶 液 1ml，置 试 管 中 ，精 密 加 入 8 .0 ，用 水 稀 释 至 1000ml)适 量 使 溶 解 并 稀 释 至 100ml，4°C保 存 。
5%三 氯 醋 酸 溶 液 5ml，混 匀 ，于 35°C±0. 5°C水 浴 中 准 确 反 应
2 0 分 钟 ，再 精 密 加 入 上 述 酪 蛋 白 溶 液 5ml，混 匀 ，滤 过 ，取续滤 测 定 法 取 25°C±0. 5°C水 浴 中 预 热 的 底 物 溶 液 2. 5m l，
液 作 为 空 白 溶 液 ，在 2 小 时 内 照 紫 外 -可 见 分 光 光 度 法 （通则 置 lc m 比 色 池 中 ，分 别 精 密 加 入 供 试 品 溶 液 或 标 准 品 溶 液
0401)，在 280nm的波长处测定吸光度，不 得 过 0. 2。 0. lm l，混 匀 ，立 即 计 时 ，使 比 色 池 内 的 温 度 保 持 在 25°C士
0.5°C ，照紫外- 可 见 分 光 光 度 法 （通 则 0401)，在 253nm 波长
纯 度 取 本 品 适 量 ，加 流 动 相 A 溶 解 并 稀 释 制 成 每 lm l 处 ，以 底 物 溶 液 为 空 白 ，准 确 读 取 1 分 钟 时 的 吸 光 度 A 。和 3
中 约 含 200单 位 的 溶 液 ，作 为 供 试 品 溶 液 ；另 取 胰 激 肽 原 酶 对 分 钟 时 的 吸 光 度 A ，标 准 品 溶 液 和 供 试 品 溶 液 需 平 行 测 定 3
照 品 （纯 度 应 大 于 95 % )适 量 ，同 法 制 成 每 l m l 中 约 含 200单 次 ，分 别 求 得 标 准 品 溶 液 和 供 试 品 溶 液 的 A A 值 （AA = A —
位 的 溶 液 ，作 为 对 照 品 溶 液 。照 高 效 液 相 色 谱 法 （通 则 0512) A 。）的 平 均 值 ，代 入 下 式 计 算 。
试 验 ，用 疏 水 性 凝 胶 为 填 充 剂 （TSKgel Phenyl-5PW,
7. 5m m X75m m ，10|ULm或 其 他 适 宜 的 色 谱 柱 以 含 1. 7mol/L r _ AA7XPs Xn
硫 酸 铵 的 磷 酸 盐 缓 冲 液 （pH 7. 0 ) ( 取 磷 酸 氢 二 钠 10. 9g，磷酸
二 氢 钠 2. 3g，加 水 溶 解 并 稀 释 至 1000ml，用 50% 磷 酸溶 液 调 a a Tx w
式 中 P 为 每 lm g 供 试 品 中 含 胰 激 肽 原 酶 的 量 ，单 位 ；
M 为供试品溶液的AA 值的平均值；
M 为标准品溶液的AA值的平均值；
PS 为标准品溶液的单位数；
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