Page 1216 - 《中国药典》2015年版 第二部 - 复件(1)
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中 国 药 典 2015年版中 胰蛋白酶
峰的保留肘间应与对照品溶液中苯酚峰的保留时间一致。 【贮 藏 】 密 闭 ，在 冷 处 保 存 ，避 免 冰 冻 。
【检 查 】 p H 值 应 为 6 .9 ?7. 8 (通 则 0631) 。
有 关 物 质 取 本 品 ，每 l m l 中 加 9. 6 m o l/L 盐 酸 溶 液 3^1
混 匀 后 作为 供 试 品 溶 液 ; 取 供 试 品 溶 液 适 量 （约相当于胰岛素 胰蛋白酶
2 单 位 ），照 胰 岛 素 项 下 的 色 谱 条 件 ，除 去 苯 酚 峰 或 间 甲 酚 峰
及 鱼 精 蛋 白 峰 ，按 峰 面 积 归 一 化 法 计 算 ，A 21脱 氨 胰 岛 素 不 得 Yidanbaimei
过 5. 0 % ，其 他 杂 质 峰 面 积 之 和 不 得 过 6. 0% 。
Trypsin
高 分 子 蛋 白 质 取 本 品 ，每 l m l 中 加 9 .6 m o l/L 盐酸溶液
3 M 混 匀 后 作 为 供 试 品 溶 液 ; 取 供 试 品 溶 液 lOOpl，照胰岛素项 本 品 系 自 猪 、羊 或 牛 胰 中 提 取 的 蛋 白 分 解 酶 。按干燥品
下 方 法 检 查 ，除去 保 留 时 间 大 于 胰 岛 素 主 峰 的 其 他 峰 面 积 ，按 计 算 ，每 lm g 中 胰 蛋 白 酶 的 活 力 不 得 少 于 2500单 位 。
面 积 归 一 化 法 计 算 ，保 留 时 间 小 于 胰 岛 素 峰 的 所 有 峰 面 积 之
和 不得过 3.0% 。 【制 法 要 求 】 本 品 应 从 检 疫 合 格 的 牛 、羊 或 猪 胰 中 提 取 ，
锌 取 本 品 适 量 ，每 l m l 中 加 9. 6 m o l/L 盐 酸 溶 液 3 0 使 所 用 动 物 的 种 属 应 明 确 ，生 产过 程 应 符 合 现 行 版 《药品生产质
其 完 全 澄 清 ，精 密 量 取 适 量 ，用 0. O lm o l/L 盐酸溶液定量稀释
制 成 每 l m l 中 约 含 锌 0. 4?0。8ptg的 溶 液 作 为 供 试 品 溶 液 ，照 量 管 理 规 范 》的 要 求 。
胰 岛 素 项 下 的 方 法 检 查 ，每 100单 位 中 含 锌 量 应 为 10?40；^ 。
【性 状 】 本 品 为 白 色 或 类 白 色 结 晶 性 粉 末 。
可 溶 性 胰 岛 素 精 密 量 取 本 品 与 O .lm ol/L 三羟甲基氨 【鉴 别 】 取 本 品 约 2mg，置 白 色 点 滴 板 上 ，加 对 甲 苯 磺
基甲烷 -盐 酸 缓 冲 液 （pH 8 .2 ，25°C ±1°C )适 量 ，等 体 积 混 合 ，
振 摇 ，25°C±1°C放 置 1 小 时 ，用 0. 2卩m 滤 膜 滤 过 ，取 滤 液 ，按 酰-L -精 氨 酸 甲 酯 盐 酸 盐 试 液 0. 2m l，搅 匀 ，即 显 紫 色 。
每 l m l 加 9. 6m o l/L 盐 酸 溶 液 3；^ 使 其 酸 化 后 作 为 可 溶 性 胰
岛素供试品溶液; 另 精密量取本品适量，按 每 l m l 加 9. 6mol/L 【检 查 】 酸 度 取 本 品 ，加 水 溶 解 并 稀 释 制 成 每 l m l 中
盐 酸 溶 液 3一，待 溶 液 澄 清 后 ，用 0. 0 1 m ol/L 盐 酸 溶 液 定 量 稀
释制成与可溶性胰岛素供试品溶液中的胰岛素浓度相当的总 含 2 m g 的 溶 液 ，依 法 测 定 ( 通 则 0631)，p H 值 应 为 5 .0 ?7 .0 。
胰 岛 素 供 试 品 溶 液 ，照 含 量 测 定 项 下 的 方 法 测 定 。含 可溶性
胰 岛 素 应 为 总 胰 岛 素 含 量 的 25. 0% ?35. 0% 。 溶 液 的 澄 清 度 取 本 品 ，加 0 .9 %氯化钠溶液溶解并稀释
制 成 每 l m l 中 含 lO m g 的 溶 液 ，依 法 检 查 （通 则 0902第 一 法 ），
苯 酣 精 密 称 取 苯 酚 适 量 ，加 O .O lm o l/L 盐 酸 溶 液 溶 解
并 定 量 稀 释 制 成 适 宜 浓 度 的 溶 液 作 为 对 照 品 溶 液 。取 本 品 ， 溶液应澄清。
按 每 l m l 中 加 9. 6 m o l/L 盐 酸 溶 液 3 # 使 其 完 全 澄 清 ，精密量 糜 蛋 白 酶 底 物 溶 液 的 制 备 取 iV-乙酰-L-酪 氨 酸 乙酯
取 适 量 ，用 O .O lm o l/L 盐 酸 溶 液 定 量 稀 释 制 成 含 苯 酚 适 宜 浓
度 的 溶 液 作 为 供 试 品 溶 液 。照胰岛 素含量测定 项下 的色 谱条 23. 7mg，置 100m l量 瓶 中 ，加 磷 酸 盐 缓 冲 液 （取 0. 067mol/L
件 ，检 测 波 长 为 270nm。取 胰 岛 素 对 照 品 适 量 ，加上述对照品 磷 酸 二 氢 钾 溶 液 38. 9 m l与 0. 0 6 7 m o l/L 磷 酸 氢 二 钠 溶 液
溶 液 溶 解 并 稀 释 制 成 每 l m l 中 含 胰 岛 素 lm g 的 溶 液 ，取 20；xl 61. 1ml，混 合 ，p H 值 为 7.0)50m l，温 热 使 溶 解 ，冷 却 后 再 稀 释
注 入 液 相 色 谱 仪 ，苯 酚 峰 与 胰 岛 素 峰 的 分 离 度 应 符 合 要 求 。
精 密 量 取 苯 酚 对 照 品 溶 液 与 供 试 品 溶 液 各 20^1，分 别 注 入液 至 刻 度 ，摇 匀 。冰 冻 保 存 ，但 不 得 反 复 冻 融 。
相 色 谱 仪 ，记 录 色 谱 图 ，按 外 标 法 以 峰 面 积 计 算 ，含 苯 酚 应为
标 示 量 的 80% ?110% 。 供 试 品 溶 液 的 制 备 取 本 品 适 量 ，精 密 称 定 ，加
0. O O lm ol/L 盐 酸 溶 液 溶 解 并 定 量 稀 释 制 成 每 l m l 中含
无 菌 取本品，加 1%无菌抗坏血 酸 溶 液 100ml振摇使溶液 0. 25m g的 溶 液 。
澄清后，经薄膜过滤法处理，依法检查(通 则 1101)，应符合规定。
测 定 法 取 底 物 溶 液 2. 0ml、0. O O lm o l/L 盐 酸 溶 液
细 菌 内 毒 素 取 本 品 ，依 法 检 查 (通 则 1143) ，每 100单位
胰 岛 素 中 含 内 毒 素 的 量 应 小 于 80EU。 0 .2 m l与 上 述 磷 酸 盐 缓 冲 液 （pH 7 .0 ) lm l，混 匀 ，作 为 空 白 。
其 他 应符 合注 射 剂 项 下 有 关 的 各 项 规 定 （通 则 0102) 。 精 密 量 取 供 试 品 溶 液 0. 2m l，加 底 物 溶 液 （预 热 至 25°C 士
【含 量 测 定 】 取 本 品 ，按 每 l m l 中 加 9. 6 m o l/L 盐酸溶液
3 0 ，使 其 完 全 澄 清 ，精 密 量 取 适 量 ，用 0. 0 1 m o l/L 盐酸溶液定 0.5°C )3. 0m l，立 即 计 时 并 摇 匀 ，使 比 色 池 内 的 温 度 保 持 在
量 稀 释 制 成 每 l m l 中 含 4 0 单 位 的 溶 液 （临 用 新 制 ），照胰岛素
项 下 方 法 测 定 ，即 得 。 25°C ± 0. 5°C，照 紫 外 -可 见 分 光 光 度 法 （通 则 0401 ) ，在
【类 别 】 同 胰 岛 素 。
【规 格 】 （l)3 m l : 300单位 （2)10ml ?? 400单位 237nm 的 波 长 处 ，每 隔 3 0 秒 读 取 吸 光 度 ，共 5 分 钟 ，每 3 0 秒
钟 吸 光 度 的 变 化 率 应 恒 定 ，且 恒 定 时 间 不 得 少 于 3 分 钟 。以
吸 光 度 为 纵 坐 标 ，时 间 为 横 坐 标 ，作 图 ，取 在 3 分 钟 内 成 直 线
部 分 的 吸 光 度 ，按 下 式 计 算 ，每 2500单 位 胰 蛋 白 酶 中 不 得 多
于 50单位的糜蛋白酶。
p = A 2 —Ax 2500_________
— 0. 0075T W X 供 试 品 效 价 (u/m g)
式 中 P 为 每 2500胰 蛋 白 酶 单 位 中 含糜 蛋 白 酶 的 量 ，单 位 ；
A2 为直线上开始的吸光度；
为直线上终止的吸光度；
：r S A 2 至 皋 读 数 的 时 间 ，分 钟 ；
W 为 测 定 液 中 含 供 试 品 的 量 ，mg;
0. 0075为 在 上 述 条 件 下 ，吸 光 度 每 分 钟 改 变 0.0075，
即相当于1 个糜蛋白酶单位。
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