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中 国 药 典 2015年版                                                               川贝母

W a n g et S. C. C h e n 的 干 燥 鳞 茎 。按 性 状 不 同 分 别 习 称 “松  再 加 入 溧 洗 液 500^x1，离 心 （转 速 为 每 分 钟 12 0 0 0 转 )30秒 ，弃
贝”、“青 贝 ”、“炉 贝 ”和 “栽 培 品 ”。夏 、秋 二 季 或 积 雪 融 化 后 采
挖 ，除 去 须 根 、粗 皮 及 泥 沙 ，晒 干 或 低 温 干 燥 。                    去 过 滤 液 ;再 离 心 （转 速 为 每 分 钟 13 0 0 0 转 ）2 分 钟 ，取 出 吸
                                                          附 柱 ，放 入 另 一 离 心 管 中 ，加 入 50M1洗 脱 缓 冲 液 ，室 温 放 置
      【性 状 】 松 贝 呈 类 圆 锥 形 或 近 球 形 ，高 0.3? 0.8c m ，
直 径 0.3?0.9c m。表 面 类 白 色 。外 层 鳞 叶 2 瓣 ，大 小 悬 殊 ，          3? 5 分 钟 ，离 心 (转 速 为 每 分 钟 12 0 0 0 转 ）1 分 钟 ，将 洗 脱 液
大 瓣 紧 抱 小 瓣 ,未 抱 部 分 呈 新 月 形 ，习 称 “怀 中 抱 月 ”;顶部闭
合 ，内 有 类 圆 柱 形 、顶 端 稍 尖 的 心 芽 和 小 鳞 叶 1?2 枚 ;先端钝          再 加 入 吸 附 柱 中 ，室 温 放 置 2 分 钟 ，离 心 （转 速 为 每 分 钟
                                                          12 0 0 0 转 ）1 分 钟 ],取 洗 脱 液 ，作 为 供 试 品 溶 液 ，置 4°C冰箱中
圆 或 稍 尖 ，底 部 平 ，微 凹 入 ，中 心 有 1 灰 褐 色 的 鳞 茎 盘 ，偶有残         备 用 。另 取 川 贝 母 对 照 药 材 O.lg，同 法 制 成 对 照 药 材 模 板
存 须 根 。质 硬 而 脆 ，断 面 白 色 ，富 粉 性 。气 微 ，味 微 苦 。
                                                          D N A 溶液。          鉴 别 引 物 ：5' C G T A A C A A G G T T T -
     II贝 呈 类 扁 球 形 ，高 0.4? 1. 4cm, 直 径 0.4 ? 1.6c m 。           PCR-RFLP 反应

外 层 鳞 叶 2 瓣 ，大 小 相 近 ，相 对 抱 合 ，顶 部 开 裂 ，内有心芽和小            C C G T A G G T G A A 3 / 和 5; G C T A C G T T C T T C A T C G A T 3 '0
鳞 叶 2?3 枚及细圆柱形的残茎。                                        P C R 反 应 体 系 ：在 200M1离 心 管 中 进 行 ，反 应 总 体 积 为 30M1，

      炉 贝 呈 长 圆 锥 形 ，高 0.7? 2. 5cm , 直 径 0.5? 2. 5 c m 。  反 应 体 系 包 括 1 0 X P C R 缓 冲 液 3M1，二 氣 化 镁 （25mmol/L)
表 面 类 白 色 或 浅 棕 黄 色 ，有 的 具 棕 色 斑 点 。外 层 鳞 叶 2 瓣 ，大        2. 4^1, d N T P ( 1 0 m m o l / L ) 0. 6pl,鉴 别 引 物 （30M mol/L) 各
                                                          0.5pl，髙保真 Taq D A N 聚 合 酶 （5U/pl) 0. 2pl,模板 lpl，无
小 相 近 ，顶 部 开 裂 而 略 尖 ，基 部 稍 尖 或 较 钝 。                     菌 超 纯 水 21.8m1。将 离 心 管 置 P C R 仪 ，P C R 反 应 参 数 ：95°C
      栽 培 品 呈 类 扁 球 形 或 短 圆 柱 形 ，高 0.5? 2c m ，直 径 1?
                                                          预 变 性 4 分 钟 ，循 环 反 应 3 0 次 （95°C 3 0 秒 ，5 5 ? 58°C
2 . 5 c m 。表 面 类 白 色 或 浅 棕 黄 色 ，稍 粗 糙 ，有 的 具 浅 黄 色 斑
点 。外 层 鳞 叶 2 瓣 ，大 小 相 近 ，顶 部 多 开 裂 而 较 平 。                3 0 秒 ，72°C 3 0 秒 ），7 2 1 延 伸 5 分 钟 。 取 P C R 反 应 液 ，置
                                                          5 0 0 y 离 心 管 中 ，进 行 酶 切 反 应 ，反 应 总 体 积 为 20M1，反 应 体
      【鉴 别 】 （1)本 品 粉 末 类 白 色 或 浅 黄 色 。
       松 贝 、育 贝 及 栽 培 品 淀 粉 粒 甚 多 ，广 卵 形 、长 圆 形 或 不       系 包 括 1 0 X 酶 切 缓 冲 液 2M1 , P C R 反 应 液 6fxl，S m a I(10U/M 1)
规 则 圆 形 ，有 的 边 缘 不 平 整 或 略 作 分 枝 状 ，直 径 5 ? 64Mm , 脐      0.5F1，无 菌 超 纯 水 11. 5pl,酶 切 反 应 在 30°C水 浴 反 应 2 小
点 短 缝 状 、点 状 、人 字 状 或 马 蹄 状 ，层 纹 隐 约 可 见 。表 皮 细 胞
                                                          时 。另 取 无 菌 超 纯 水 ，同 法 上 述 P C R - R F L P 反 应 操 作 ，作为
类 长 方 形 ，垂 周 壁 微 波 状 弯 曲 ，偶 见 不 定 式 气 孔 ，圆 形 或 扁 圆
形 。螺 纹 导 管 直 径 5?2 6 p m 。                                空白对照。
                                                                电 泳 检 测 照 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 法 （通 则 0541) ，胶 浓 度 为
       炉 贝 淀 粉 粒 广 卵 形 、贝 壳 形 、肾 形 或 楠 圆 形 ，直 径 约 至
60M m ，胳 点 人 字 状 、星 状 或 点 状 ，层 纹 明 显 。蜾 纹 导 管 和 网 纹       1 . 5 % ，胶 中 加 入 核 酸 凝 胶 染 色 剂 GelRed;供 试 品 与 对 照 药 材
导管直径可达64pm。
                                                          酶 切 反 应 溶 液 的 上 样 量 分 别 为 8M1 , D N A 分 子 量 标 记 上 样 量
      (2)取 本 品 粉 末 10g ，加 浓 氨 试 液 10ml,密 塞 ，浸 泡 1 小       为 lMl(0.5Mg/Ml)。电 泳 结 束 后 ，取 凝 胶 片 在 凝 胶 成 像 仪 上 或
时 ，加 二 氣 甲 烷 40ml，超 声 处 理 1 小 时 ，滤 过 ，滤 液 蒸 干 ，残渣
加 甲 醇 0 . 5 m l 使 溶 解 ，作 为 供 试 品 溶 液 。另 取 贝 母 素 乙 对 照     紫 外 透 射 仪 上 检 视 。供 试 品 凝 胶 电 泳 图 谱 中 ，在 与 对 照 药 材
品 ，加 甲 醇 制 成 每 l m l 含 l m g 的 溶 液 ，作 为 对 照 品 溶 液 。照      凝 胶 电 泳 图 谱 相 应 的 位 置 上 ，在 100? 250bp应 有 两 条 D N A
薄 层 色 谱 法 （通 则 0502)试 验 ，吸 取 供 试 品 溶 液 1? 6MK 对照
品 溶 液 2M 1,分 别 点 于 同 一 硅 胶 G 薄 层 板 上 ，以乙酸乙酯-甲             条 带 ，空 白 对 照 无 条 带 。
醇-浓 氨 试 液 -水 （18 : 2 : 1 : CK1 )为 展 开 剂 ，展 开 ，取 出 ，晾            【检 査 】 水 分 不 得 过 15.0% (通 则 0832第 二 法 ）。
干 ,依 次 喷 以 稀 碘 化 铋 钾 试 液 和 亚 硝 酸 钠 乙 醇 试 液 。供试品
色 谱 中 ，在 与 对 照 品 色 谱 相 应 的 位 置 上 ，显 相 同 颜 色 的 斑 点 。             总 灰 分 不 得 过 5 . 0 % (通 则 2302)。
                                                                【漫 出 物 】 照 醇 溶 性 浸 出 物 测 定 法 （通 则 2201)项 下 的
      (3)聚 合 酶 链 式 反 应 -限 制 性 内 切 酶 长 度 多 态 性 方 法 。       热 浸 法 测 定 ，用 稀 乙 醇 作 溶 剂 ，不 得 少 于 9.0% 。
      横 板 D N A 提 取 取 本 品 0. lg,依 次 用 7 5 % 乙 醉 1ml、灭
菌 超 纯 水 l m l 淸 洗 ，吸 干 表 面 水 分 ，置 乳 钵 中 研 磨 成 极 细 粉 。           【含 量 测 定 】 对 照 品 溶 液 的 制 备 取 西 贝 母 碱 对 照 品 适
取 20mg,置 1.5ml离 心 管 中 ，用 新 型 广 谱 植 物 基 因 组 D N A          量 ，精 密 称 定 ，加 三 氣 甲 烷 制 成 每 l m l 含 0.2m g 的 溶 液 ，即 得 。
快 速 提 取 试 剂 盒 提 取 D N A [加 人 缓 冲 液 API 400^1和 R N A
酶 溶 液 （10mg/ml)4Ml,涡 漩 振 荡 ，65°C水 浴 加 热 1 0 分 钟 ，加              标 准 曲 线 的 制 备 精 密 量 取 对 照 品 溶 液 0.lml、0.2m l 、
入 缓 冲 液 A P 2 130M1，充 分 混 勻 ，冰 浴 冷 却 5 分 钟 ，离 心 （转速       0_4ml、0. 6ml、l_0ml，置 2 5 m l 具 塞 试 管 中 ，分 别 补 加 三 氣 甲
为 每 分 钟 14 0 0 0 转 ）1 0 分 钟 ；吸 取 上 淸 液 转 移 入 另 一 离 心 管    烷 至 10. 0 m l ，精 密 加 水 5ml、再 精 密 加 0.05% 溴 甲 酚 绿 缓 冲
中 ，加 人 1 . 5 倍 体 积 的 缓 冲 液 A P 3 / E ，混 匀 ，加 到 吸 附 柱 上 ，
离 心 （转 速 为 每 分 钟 13 0 0 0 转 ）1 分 钟 ，弃 去 过 滤 液 ，加入漂洗       液 (取 溴 甲 酚 绿 0. 05g，用 0. 2 m o l / L 氢 氧 化 钠 溶 液 6m l 使溶
液 700M1，离 心 （转 速 为 每 分 钟 12 0 0 0 转 ）3 0 秒 ，弃 去 过 滤 液 ;   解 ，加 磷 酸 二 氢 钾 lg,加 水 使 溶 解 并 稀 释 至 100m l ，即 得 ）

                                                          2ml,密 塞 ，剧 烈 振 摇 1 分 钟 ，转 移 至 分 液 漏 斗 中 ，放 置 3 0 分

                                                          钟 。取 三 氣 甲 烷 液 ，用 干 燥 滤 纸 滤 过 ，取 续 滤 液 ，以 相 应 的 试

                                                          剂 为 空 白 ，照紫外-可 见 分 光 光 度 法 （通 则 0401)，在 4 1 5 n m 的

                                                          波 长 处 测 定 吸 光 度 ，以 吸 光 度 为 纵 坐 标 ，浓 度 为 横 坐 标 ，绘制

                                                          标准曲线。
                                                                测 定 法 取 本 品 粉 末 （过 三 号 筛 ）约 2g ，精 密 称 定 ，置具

                                                          塞 锥 形 瓶 中 ，加 浓 氨 试 液 3ml,浸 润 1 小 时 ，加 三 氣 甲 烷 -甲 醇
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